熒光PCR擴增試劑凍干方法及應用示例說明

隨著臨床醫(yī)學及生物診斷試劑的發(fā)展，為了滿足臨床需要，需要發(fā)明一種使用方面，不需要低溫保存及運輸?shù)臒晒釶CR擴增試劑。

熒光PCr反應體系中含有熒光探針等試劑需要低溫保存及避免其化學性質(zhì)發(fā)生變化，因此需要采用凍干的方法。說到熒光PCr擴增試劑的凍干，其實跟其他藥品或診斷試劑原理上沒什么區(qū)別。主要方法步驟包括。

1、配液。將熒光PCR擴增緩沖液，引物，探針，啟動酶等及凍干保護劑，按照配方進行混合配液。我們都知道凍干的藥物或診斷試劑，其中凍干保護劑包含賦型劑等的選擇非常重要。常見的凍干保護劑包括糖、多元醇類、聚合物、表面活性劑類、氨基酸類、鹽類等。而一種凍干試劑，通常是不是添加一種保護劑，而是多種保護劑連用。也就是我們這個試劑配方的摸索其實是相對來說zui耗時間，也是關(guān)鍵所在。如：熒光PCR擴增試劑的凍干添加甘油、海藻糖、牛血清蛋白，甲酰胺等。通常是多種一起用。

2、凍干。將上述凍干液體配制好，分裝到PCR擴增管或者八連管中。然后放入凍干機，開始進行整個凍干過程。對于凍干診斷試劑由于一般量很少，一個管內(nèi)通常有50uL或者30ul，量很小，凍干工藝優(yōu)化好的話，一般幾個小時就可以凍一批。如將分裝好的試劑放入凍干機中，在-35度預凍三小時。預凍完成后，凍干機內(nèi)溫度不變，開始抽真空降到10pa處理兩個小時。2個小時升華結(jié)束后，真空狀態(tài)下將凍干機內(nèi)部溫度升至10度，真空處理兩小時。真空狀態(tài)下繼續(xù)將凍干機內(nèi)部溫度升至30度，處理兩小時。這樣整個凍干就完成了，整個過程9個小時，凍干完畢，蓋上擴征管或8連管蓋。通過這樣凍干的方法制備好的熒光PCR凍干粉，四季常溫避光保存，性質(zhì)穩(wěn)定，運輸方便，使用方便，使用時只需要添加溶解即可。

任何一種含熒光探針的PCR試劑或者其他試劑如果想通過凍干的方法獲得穩(wěn)定的粉或者凍干微球，其實都是可以做成的，主要的是凍干配方的研究，對于凍干機選擇制藥用，工藝全的即可。

   以上醫(yī)療診斷凍干機系列，就可以用于診斷試劑、PCR熒光試劑的凍干、各種生物試劑及體外試劑均可以。